медицинский каталог




Кожные и венерические болезни. Руководство для врачей. Том 4

Автор Ю.К.Скрипкин (ред.)

контроле за эффективностью лечения больных сифилисом целесообразно использовать количественную методику постановки MP, так как это позволяет экономить время для постановки реакции и ингредиенты, что снижает стоимость серологического обследования больных сифилисом в процессе лечения.

Количественная методика постановки MP. В 9 лунок горизонтального ряда пластины, начиная со 2-й лунки, вносят по 3 капли

изотонического раствора натрия хлорида и добавляют в 1-ю и 2-ю

лунки по 3 капли исследуемой сыворотки крови. Содержимое 2-й

лунки перемешивают пастеровской пипеткой, набирая его в пипетку

и выпуская из нее в лунку 5—6 раз. Часть содержимого набирают

в пипетку. Три капли его переносят в 3-ю лунку, а оставшееся в

пипетке возвращают во 2-ю лунку. Из 3-й лунки 3 капли переносят

в 4-ю и т. д. до 10-й лунки, из которой 3 капли удаляют. Таким

образом получают двукратные разведения сыворотки крови 1:2, 1:4,

1:8 и далее до 1:516. В 1-ю лунку изотонический раствор не наливают, а вносят только 3 капли сыворотки крови, т. е. исследуют

цельную сыворотку крови. Во все лунки добавляют по одной капле

эмульсии кардиолипинового антигена. Пластину встряхивают 5 мин,

после чего во все лунки вносят по 3 капли изотонического раствора

натрия хлорида. Через 5 мин регистрируют результаты. ,

П8 ?]

canned by К. А. А. 3

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ, ТР1). Новым этапом в серодиагностике сифилиса явился разработанный R. Nelson и М. Mayer (1949) тест для обнаружения специфических сифилитических антител. Суть этой реакции заключается в потере бледными трепонемами подвижности в присутствии иммобилизирующих антител и комплемента.

Реакция быстро завоевала признание во всем мире. В нашей стране ее изучали Г. Б. Беленький (1959, 1960, 1961), Н. М. Овчинников (1961, 1962), У. М. Мирахмедов (1962, 1963), Л. В. Сазонова (1968) и др.

В результате многолетнего изучения РИТ признана наиболее специфичной реакцией на сифилис. В настоящее время ее считают арбитром при постановке диагноза, однако следует учитывать, что иммобилизины в достаточном для выявления количестве определяются в крови значительно позже других антител, в связи с чем при подозрении на первичный сифилис постановка РИТ нецелесообразна. Следует принимать во внимание и то, что РИТ может быть отрицательной и при поздних формах сифилиса вследствие малого количества иммобилизинов, что указывает на необходимость использовать для обследования не одну, а несколько специфических реакций. Л. В. Сазонова, Л. Д. Верзина (1970), осуществляя постановку РИТ с увеличенными объемами испытуемой сыворотки крови, показали возможность повышения чувствительности данного теста.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ, FT А). Это широко распространенная специфическая реакция на сифилис. Принцип этой реакции разработали Т. Weller и A. Coons (1954). W. Deacon, V. Falcone, A. Harris (1957) применили ее для выявления противо-трепонемных антител. В клинической практике для серодиагностики сифилиса ее впервые использовали L. Borel, P. Durel (1959). В нашей стране РИФ изучали с 1960 г. В. Н. Беднова и др. Исследователями были разработаны такие методики постановки, как РИФ-200, РИФ-абс с сывороткой крови и капиллярной кровью, РИФ количественная, РИФ-ц с цереброспинальной жидкостью, причем каждая модификация имеет свое назначение. Первоначально широкое распространение получила РИФ-200.

В. Н. Беднова (1969) при исследовании 1098 сывороток крови людей, имевших половой контакт с больными сифилисом, леченых и нелеченых больных различными формами сифилиса, а также «проблемных» сывороток крови, позитивных в РИТ, выявила высокую чувствительность РИФ-200 при всех формах сифилиса. Высокая специфичность РИФ-200 установлена при исследовании 875 «проблемных» сывороток крови, негативных по РИТ. Получено только 0,34% неспецифических положительных результатов, в то время как в КСР в этой группе процент неспецифических результатов составил 13,7—20,9 по различным тестам.

Е. Hunter, W, Deacon и P. Meyer (1964) предложили более чувствительную модификацию FTA-ABS, при которой испытуемые сыворотки крови разводят лишь в 5 раз, а групповые антитела связывают сорбентом. В нашей стране методика постановки РИФ-абс с отечественными ингредиентами была разработана Л. Г. Хантке (1974) и Э. А. Орлиной (1975). Э. А. Орлина предложила также методику постановки РИФ-абс со свежей капиллярной кровью, взятой из пальца, для обследования на наличие сифилиса детей и больших групп населения.

При исследовании цереброспинальной жидкости высокую чувствительность и специфичность РИФ-ц установила И. И. Яковлева (1978), показавшая возможность использования для этой модификации антигена из культуральных бледных трепонем.

С. М. Воробейчик (1973) рекомендовала исследование в РИФ высушенных сывороток крови, Л. С. Тацкая (1976) разработала методику изготовления лиофилизированного антигена для РИФ из патогенных бледных трепонем. Благодаря своей высокой чувствительности и специфичности эта реакция за рубежом является основным диагностическим тестом на наличие сифилиса. В нашей стране РИФ в основном используется для подтверждения диагноза сифилиса и распознавания биологических ложноположительных результатов, полученных в липоидных тестах [Беднова В. Н. и др., 1992].

Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA). В последние десятилетия изучается новый тест, по механизму реакции, чувствительности и специфичности близкий к РИФ. Б. Engvall и соавт., S. Avrameas (1971) разработали основные принципы ИФА. Для выявления сифилитических антител впервые его применили в 1975 г. J. Velkamp и A. Viaser. Принцип реакции заключается в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя, с антителом испытуемой сыворотки крови и выявлении специфического комплекса антиген — антитело с помощью ант и видовой иммунной сыворотки, меченной ферментом. Для сенсибилизации твердофазного носителя пригоден некорпускулярный антиген, постановка реакции легко автоматизируется, учет ее результатов может быть визуальным и фотометрическим.

Нами совместно с А. В. Котровским (1981—1983) при постановке ИФА предложено использовать озвученный трепонемный антиген для РСК производственного изготовления, разработана методика постановки реакции с отечественными материалами и ингредиентами.

J. Morrison-Plummer и соавт. (1983) установили наиболее высокую чувствительность теста при использовании в качестве антигена протеина наружной оболочки бледной трепонемы.

Чувствительность и специфичность ИФА аналогичны РИФ [Беднова В. Н. и др., 1995]. А. В. Котровский (1986) установил участие в этих тестах одних и тех же антител. По его данным, чувствительность ИФА соответствует 98,9%, специфичность — 99,1%.

R. Stervens, М. Schmitt (1985) при параллельном исследовании в ИФА и РИФ-абс в 218 сыворотках крови больных различными формами сифилиса выявили почти аналогичную чувствительность этих тестов — 99,5 и 100% соответственно.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). В 1965 и 1967 гг. Т. Rathlev и в 1966 г. Т. Tomizawa предложили в качестве диагностического теста на сифилис РПГА. Макромодификацию этой реакции именуют ТРНА, микромодификацию — МНА-ТР, автоматизированный вариант — АМНА-ТР, реакцию с макрокапсулами вместо эритроцитов — МСА-ТР и т. д.

РПГА широко изучена за рубежом с диагностикумом японского производства, при этом она зарекомендовала себя как высокочувствительный и специфичный тест. A. Luger и J. Spendlingwimmer (1972) считают ее более чувствительной и специфичной, чем РИФ-абс. Высоко оценили простоту постановки, низкую стоимость и высокую чувствительность РПГА с антигеном из культуральных бледных трепонем A. A. Alqudan и Ann Mostratos (1982).

М. Gibowsky и соавт. (1985) в результате исследования 6270 сывороток крови больных дерматовенерологической клиники подтвердили простоту постановки РПГА, ее специфичность и высокую чувствительность, особенно при поздних формах сифилиса. Кроме того, РПГА все шире используется в качестве специфической отборочной реакции на сифилис.

В нашей стране Г. Ф. Тимченко, Н. Н. Басова, В. Н. Беднова разработали отечественный диагностикум для РПГА из патогенных и культуральных бледных трепонем. Сравнительное изучение РПГА с отечественными ингредиентами, РИТ, РИФ-абс, КСР и MP показало высокую чувствительность и специфичность РПГА при сифилисе, совпадающую с результатами РИФ-абс.

РПГА ставят в качественном и количественном вариантах, существуют макро- и микромодификации.

Методика постановки качественной РИГА с отечественными ингредиентами. Макромодификация. В 3 лунки полистироловой пластины наливают по 0,4 мл изотонического раствора натрия хлорида. В 1-ю и 3-ю лунки добавляют по 0,4 мл испытуемой сыворотки крови в исходном разведении (1:125). Содержимое лунок перемешивают, из 1-й лунки 0,4 мл переносят во 2-ю, перемешивают и по 0,4 мл удаляют из 3-й и 2-й лунок. Затем в 1-ю и 2-ю лунки добавляют по 0,05 мл (по 1 капле) трепонемного эритроцитарного диагностикума, в 3-ю лунку — 0,05 мл несенсибилизированных эритроцитов. Осторожным покачиванием пластины доводят смесь в каждой лунке до гомогенного состояния и оставляют пластину на неподвижной поверхности на белой бумаге, чтобы читать результат, не двигая пластину.

Микромодификация. При постановке РПГА в микромодификации используют микротитраторы типа Такачи. Постановка реакции отличается объемными соотношениями и концентрацией эритроцитов. Объем разведенной сыворотки крови равен объему добавляемого диагностикума — 0,025 мл. Прокаленными и остуженными термостойкими петлями для титрования вносят в 1-ю и 3-ю лунки испытуемую сыворотку крови, добавляя ее к 0,025 мл изотонического раствора натрия хлорида, внесенного в 3 лунки. Вращением термостойкой петли достигают перемешивания и обеспечивают захват из

лунки 0,025 мл смеси, которую переносят из 1-й во 2-ю лунку, затем из 2-й и 3-й удаляют. Доведенный до рабочего разведения трепонемный антигенный диагностикум капельницей с мерной насадкой вносят в 1-ю и 2-ю лунки, а в 3-ю лунку добавляют контрольные

страница 21
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73

Скачать книгу "Кожные и венерические болезни. Руководство для врачей. Том 4" (5.06Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(21.11.2018)