медицинский каталог




Кожные и венерические болезни. Руководство для врачей. Том 4

Автор Ю.К.Скрипкин (ред.)

эритроциты.

При получении положительного результата в первых двух лунках испытуемая сыворотка крови должна быть исследована по количественному методу макро- или микромодификации РПГА с целью определения титра специфических антител.

Методика постановки количественной РПГА. Макромодификация. В лунки полистироловой пластины наливают по 0,4 мл изотонического раствора натрия хлорида. В 1-ю и последнюю лунки одного ряда добавляют по 0,4 мл испытуемой сыворотки крови в исходном разведении (1:125). Содержимое 1-й лунки перемешивают пипеткой или шприцем-дозатором и переносят по 0,4 мл из каждой предыдущей лунки в последующую; 0,4 мл из предпоследней лунки выливают. Затем во все лунки, кроме последней, добавляют по 0,05 мл (по 1 капле) диагностикума, в последнюю лунку — 0,05 мл контрольных эритроцитов.

Микромодификация. Прокаленными и остуженными петлями для титрования испытуемую сыворотку крови вносят в изотонический раствор натрия хлорида 1-й лунки. Вращением петли достигают перемешивания и обеспечивают захват из лунки 0,025 мл смеси, которую переносят в следующую лунку. Таким образом, производят титрование с двукратным интервалом и получают ряд разведений испытуемой сыворотки крови от 1:250 до 1:8000— 1:16 000. В последнюю лунку капельницей вносят 0,025 мл исходного разведения сыворотки крови для контроля. Доведенный до рабочего разведения диагностикум вносят в каждую лунку по 0,025 мл, кроме последней, куда добавляют контрольные эритроциты (0,025 мл).

Обязательные контроли РПГА. 1. Отсутствие спонтанной агглютинации. В две лунки вносят по 0,4 мл изотонического раствора натрия хлорида (по 0,025 мл для микрометода), затем в одну лунку — диагностикум, а в другую — контрольные эритроциты по 0,05 мл (0,025 мл для микрометода).

2. Определение активности диагностикума. Используют заведомо позитивную сыворотку крови, дающую положительный результат (++++; +++) в разведении не менее 1:500 для макрометода и 1:200 для ми к ро метод а. Воспроизводимость установленного титра указывает на активность диагностикума.

Учет результатов. Результаты РПГА учитывают через IV2—2 ч для микромодификации и через 2—4 ч или на следующий день для макромодификации. Неподвижно стоящие пластины, даже при высыхании их содержимого, сохраняют картину полученного результата.

Оценка результатов реакции: им положительная РПГА. Эритроциты равномерно устилают всю

поверхность лунки (в виде зонтика). +++ положительная РПГА. Эритроциты устилают всю поверхность

лунки, часть их соскальзывает к центру.

\

++ слабоположительная РПГА, Эритроциты образуют пленку на небольшом участке.

+ отрицательная РПГА. Эритроциты ровным «колечком» или «пуговкой» лежат на самом дне лунки (без окружающего зернистого осаждения).

Хр. Руева и соавт. (1985) изучали чувствительность и специфичность РПГА, РИФ-абс и РИТ при исследовании 526 образцов сыворотки крови больных сифилисом и лиц, свободных от данной инфекции. При выявленной скрытой инфекции установлена наибольшая чувствительность РПГА (100%) при чувствительности РИФ-абс 97,63% и РИТ 57,14%. Отмечена также высокая специфичность РПГА.

Несмотря на значительное количество тестов для серодиагностики сифилиса, их высокую чувствительность и специфичность, имеется ряд вопросов, требующих разрешения.

В последние десятилетия с помощью современных методов исследования широко изучается динамика образования антител в организме больных сифилисом до, в процессе и после окончания лечения. В основном это вызвано тем, что у пациентов, полноценно леченных по поводу сифилиса, в течение длительного времени остаются положительными результаты специфических серологических реакций на сифилис, что усложняет решение вопроса об излечен-ности больных, а также постановку диагноза раннего врожденного сифилиса. Затруднена также дифференциальная диагностика рецидива заболевания и реинфекции.

При изучении антителообразования в организме больных сифилисом было установлено, что первыми после заражения вырабатываются специфические IgM, выявляемые уже на 2-й неделе после заражения и достигающие максимальной концентрации в крови на 6—9-й неделе. Через 6 мес после окончания терапии у большинства больных в крови они не определяются. На 4-й неделе после инфицирования организм начинает продуцировать в достаточной степени специфические IgG, причем их концентрация в крови значительно превосходит таковую IgM. Этот вид иммуноглобулинов в наибольшем количестве определяется через I—2 года после заражения. Примечательно, что специфические IgM перестают вырабатываться при исчезновении из организма антигена, а секреция IgG, по мнению ряда авторов, продолжается клонами клеток памяти. Кроме того, крупные молекулы IgM не проходят через плаценту от матери к плоду, в связи с чем по их наличию у ребенка судят об его инфицировании бледной трепонемой.

Ввиду того что концентрация в крови специфических IgM закономерно снижается после эффективного лечения, рост титра этих антител может служить вспомогательным признаком наличия рецидива заболевания или реинфекции. Эти положения способствовали разработке ряда серологических тестов для выявления специфических IgM.

В 1966 г. началось изучение IgM-FTA-ABS, в 1977 г. была предложена его модификация 19S IgM-FTA-ABS, затем — 19S IgMТРНА. В основе этих тестов лежат разделение с помощью гель-фильтрации испытуемых сывороток крови на 19S IgM и 7S IgG и выявление первых с помощью иммунофлюоресцентного метода и теста гемагглютинации.

Выделение 19S IgM из испытуемых сывороток крови является сложным, дорогостоящим и длительным процессом, требующим специальной аппаратуры и высококвалифицированных специалистов. В связи с этим усилия исследователей были направлены на разработку более простых и доступных методов.

В 1980 г. В. Schmidt описал реакцию гемадсорбции на твердофазном носителе — IgM-SPHA, объединяющую элементы постановки ИФА и РПГА. Затем была осуществлена постановка 19S IgM-SPHA (1981). В 1983 г. E.-G. Lindenschmidt и соавт. предложили тест IgM-TP-ABS-ELISA. В 1984 г. Т. Sato и соавт. разработали новую модификацию реакции гемагглютинации — TP-IgM-HA.

Много работ посвящено оценке этих тестов, однако единой точки зрения об их чувствительности и специфичности нет, так как ингредиенты для этих реакций и их постановка не стандартизованы.

F. Muller и Е. lindenschmidt (1981) на основании изучения 408 сывороток крови леченых и нелеченых больных сифилисом в 19S IgM-FTA-ABS, 19S IgM-TPHA и IgM-SPHA установили достоверную корреляцию между первыми двумя тестами, в то время как IgM-SPHA оказалась высокоспецифичным, но недостаточно чувствительным тестом. Однако постановку 19S IgM-FTA-ABS авторы считают крайне трудоемкой, a 19S IgM-TPHA трудной при учете результатов.

Аналогичные результаты чувствительности указанных тестов получили Е. Alessi и соавт. (1985) на сыворотках крови больных первичным и вторичным сифилисом. В то же время они отмечают, что воспроизводимость и специфичность SPHA в значительной степени зависят от качества твердофазного носителя.

S. Merlin и соавт. (1985), изучая чувствительность и специфичность IgM-SPHA и IgM-FTA-ABS, обнаружили аналогичную чувствительность и значительно большую специфичность IgM-SPHA (97,4% и 89,6% соответственно). В связи с этим авторы считают основным назначением теста IgM-SPHA определение активности сифилитического процесса, диагностику раннего врожденного сифилиса, установление излеченности, распознавание биологических ложноположительных результатов серологических реакций, выявление рецидивов заболевания и реинфекций.

Углубленное изучение IgM-SPHA провели A. Luger и соавт. (1982) на 63 019 сыворотках крови параллельно с VDRL, АМНА-Тг, FTA-ABS, IgM-FTA-ABS, 19S IgM-FTA-ABS. Характерно, что получены совпадающие результаты в IgM-SPHA и 19S IgM-FTA-ABS. Учитывая простоту и экономичность постановки IgM-SPHA, авторы считают, что этот тест является ценным для характеристики активности сифилитического процесса вообще и в ЦНС в частности, а также для отличия рецидива заболевания от реинфекций. Большое внимание авторы уделяют подбору антигена для постановки IgM-SPHA.

Совпадение результатов с VDRL исследователи отмечали только в 77,5% случаев, что объясняется выявлением разных антител.

Т. Sato и соавт. (1984) исследовали 2475 сывороток крови в десяти современных тестах и установили высокую чувствительность (97,6%) и специфичность (99,7%) TP-IgM-HA. Особенность этого теста заключается в сенсибилизации эритроцитов антисывороткой к человеческому IgM и обработке ими испытуемых сывороток крови. Образование комплекса антитело против IgM человека — противо-трепонемный IgM из испытуемой сыворотки крови выявляется эритроцитами, сенсибилизированными ультраозвученной взвесью патогенных бледных трепонем. Преимущество сенсибилизации антисывороткой эритроцитов вместо лунок планшета заключается в прочности связей эритроцитов с антителом, благодаря чему многократные промывания и концентрация эритроцитов, сенсибилизированных бледной трепонемой, не играют такой роли, как при постановке SPHA, что и обусловливает высокую чувствительность теста.

М. Gibowski, Т. Machonko (1985) в результате динамического изучения в 19S IgM-FTA-ABS и ТРНА сывороток крови леченых и нелеченых больных ранними и поздними формами сифилиса пришли к заключению, что выявление специфических IgM через 6 мес после окончания лечения указывает на наличие в организме активных бледных трепонем и необходимость специфического лечения.

Современную систему обследования пациентов на наличие сифилиса R. Ulrich и соавт. (1986) представляют следующим образом. В качестве поисковой реакции или отборочного теста следует применять ТРМА, положительный результат которой необходимо подтверждать FTA-ABS. При позитивности обеих реакций и отсутствии клинических и анамнестических указаний на сифилис показано исследование сыворотки крови в тесте 19S IgM-FTA-ABS.

Для контроля лечения на всем этапе наблюдения за больным, а также суждения об активности процесса нужна регулярная постановка VDRL.

Особое внимание привлекают исследования по изучени

страница 22
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73

Скачать книгу "Кожные и венерические болезни. Руководство для врачей. Том 4" (5.06Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(10.12.2018)