медицинский каталог




Кожные и венерические болезни. Руководство для врачей. Том 4

Автор Ю.К.Скрипкин (ред.)

й постгонорейных осложнений [Антонье-ва Н. А., 1983].

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГОНОРЕИ

Установление этиологического диагноза гонореи возможно только при обнаружении возбудителя заболевания в патологическом отделяемом.

Наиболее распространенным методом выявления гонококка является бактериоскопический. Исследуют по 2 мазка из каждого очага поражения: один для ориентировочной микроскопии обрабатывают 1 % водным раствором метиленового синего или 0,5% водным раствором бриллиантового зеленого, другой — для окончательной идентификации гонококков окрашивают по способу Грама. Идентификация гонококка производится на основании его свойств: морфологии, расположения и отношения к окраске по способу Грама.

Диаметр гонококка 0,6—1,0 мкм. Размножаясь делением в разных плоскостях, гонококки не образуют цепочек. Внутри лейкоцитов гонококки располагаются парами или группами так, что одни диплококки лежат по отношению к другим под разным утлом. Внеклеточное расположение гонококков также имеет характерные особенности. Часто гонококки лежат на клетках плоского эпителия в большом количестве с перпендикулярным расположением диплококков друг к другу внутри ряда. Частота внутри- и внеклеточного нахождения гонококков зависит как от периода заболевания, так и от методики взятия материала.

Основной дифференциальный признак — отношение гонококка к окраске по методу Грама. Гонококки грамотрицательны, т. е. легко обесцвечиваются спиртом и окрашиваются дополнительной розовой краской.

Положительным лабораторный анализ на гонококки можно считать только в случае выявления их типичных форм в мазках, окрашенных метиленовым синим (бриллиантовым зеленым) и по методу Грама.

Чувствительность бактериоскопического метода исследования явно недостаточна при диагностике торпидно протекающей и хронической гонореи, при обнаружении в мазках измененных форм микроорганизмов, при экстрагенитальной локализации процесса, а также при решении вопроса об излеченности. В этих случаях необходимо бактериологическое исследование. Без него не может быть поставлен диагноз гонореи у детей, у которых значительно чаще, чем у взрослых, в мочеполовых органах находятся другие представители рода нейссерий.

Имеется огромная литература о чувствительности бактериологического метода исследования, по описанию питательных сред для выделения, культивирования и идентификации гонококков. По мнению ряда авторов, бактериологический метод в 2—3 раза повышает число выявляемых больных гонореей.

Решающим при бактериологической диагностике гонореи является качество питательных сред. В течение многих лет для выделения гонококков от больных в нашей стране использовался мясопептонный агар из кроличьего мяса или свежих бычьих сердец с добавлением 25—30% асцитической жидкости от больных с сердечной недостаточностью. По мере расширения бактериологической диагностики гонореи и лечения больных с заболеванием сердца медикаментозными средствами количество асцитической жидкости не могло обеспечить потребностей лабораторий, осуществляющих бактериологическую диагностику гонореи. В связи с этим В. Н. Бедновой и М. В. Яцухой (1975) были разработаны безасцитные питательные среды из ингредиентов производственного изготовления.

Один из вариантов безасцитной питательной среды изготавливается производственным путем под названием «Питательная среда для выделения гонококков, сухая». Для приготовления рабочей среды в лабораториях требуется только стерильная дистиллированная вода. Отечественная безасцитная питательная среда обладает высокими ростовыми свойствами.

За рубежом широкое распространение получили среда Thayer— Martin и его модификации коммерческого производства. В последние годы организован выпуск сред в микроупаковках («Микрокульт» и др.), представляющих собой пластмассовые пластинки с углублениями, заполненными средой; при выращивании посевов создается атмосфера с повышенным содержанием СО2, а через 18 ч посевы обрабатывают реактивом на оксидазу. Этот метод не пригоден для исследования материала из прямой кишки и ротоглотки из-за обильной посторонней флоры в первом случае и наличия других нейссерий во втором.

Помимо сред, предназначенных для непосредственного посева из обследуемого очага, применяют транспортировочные среды, или среды сохранения. Эти среды служат не для размножения гонококка, а для сохранения его жизнеспособным. Долгое время наиболее распространенной была среда Стюарта (1946), модификацию которой использовали в нашей стране Н. М. Овчинников и др. Однако опыт применения этих сред показал, что ими можно пользоваться только при четкой организации доставки испытуемого материала в бактериологическую лабораторию. Период с момента взятия материала до его посева на питательную среду не должен превышать 6 ч при сохранении в условиях холодильника при температуре 4°С. Поэтому большинство отечественных и зарубежных исследователей предпочитают непосредственный посев патологического материала на питательную среду.

Для подавления сопутствующей гонококку бактериальной флоры и повышения интенсивности его роста в среду добавляют антибиотики;' в нашей стране — 20 ЕД/мл полимиксина М сульфата и 6,2 ЕД/мл ристомицина сульфата, вместо которого можно использовать линкомицина гидрохлорид — 2 мкг/мл. Без добавления к среде антибиотиков невозможно выделение гонококка из прямой кишки [Мастбаум М. Д., 1985] и ротоглотки [Капцева Г. С, 1981].

P. Bonin и соавт. (1984) отмечают, что в различных регионах чувствительность штаммов гонококка к антибиотикам неодинаковая. Это надо учитывать при изготовлении сред. Они считают целесообразным посев из каждого очага на среду с антибиотиками и без них. Было установлено, что штаммы гонококка, чувствительные к ванкомицину, обычно нуждаются для роста в аргинине, гипоксантине и урациле. Эти же авторы предполагают, что такие штаммы являются причиной асимптомной инфекции, по крайней мере у мужчин.

Для дифференциации грамотрицательных кокков необходимо выделение их в чистой культуре. При этом следует учитывать их рост на необогащенных питательных средах и при комнатной температуре, так как в таких условиях хорошо размножаются непатогенные нейссерий. При выделении чистой культуры изучают морфологию, расположение, окраску выделенного микроорганизма, вид колоний, оксидазную, каталазную и сахаролитическую активность. Наиболее трудным является отличие гонококка от менингококка.

Колонии гонококка вырастают в течение 1—2 сут, хотя наблюдается поздний рост —на 7—8-е сутки, особенно если материалом для посева служит слизь из канала шейки матки. Все колонии гонококка имеют круглые очертания, ровные края, блестящую поверхность; они прозрачные, бесцветные или слегка беловатые, слизистого характера, легко снимаются с поверхности среды. При микроскопии окрашенных по методу Грама мазков из культур гонококки выглядят в основном отдельными грамотрицательными кокками, беспорядочно рассыпанными по периферии скопления и более густо расположенными в центре.

Гонококки, как и другие нейссерий, вырабатывают цитохромок-сидазу. Это выявляется путем заливки поверхности роста культуры 1 % водным раствором диметилпарафенилендиамина или другим реактивом: сначала наблюдается покраснение колоний гонококка, а затем почернение.

R. Saginur и соавт. (1982) изучали каталазный тест для идентификации гонококков. Для постановки реакции использовали 30% раствор Н2О2. При соприкосновении поверхности колоний гонококка с этим раствором в 100% случаев отмечалось мгновенное образование пены. Каталазоположительными бывают отдельные штаммы других нейссерий и бранхамелл. Авторы считают возможным использовать каталазную реакцию в качестве отборочного теста на наличие гонококков с последующим подтверждением путем изучения сахаро-литических свойств.

Ферментативные свойства нейссерий изучаются давно, описаны соответствующие методики и питательные среды. В Центральном научно-исследовательском кожно-венерологическом институте в 1978 г. была разработана оригинальная желточная среда ферментации для выявления сахаролитических свойств нейссерий, обладающих высокой чувствительностью и специфичностью.

В 1968 г. R. Pospisil и соавт, предложили экономную модификацию определения сахаролитических свойств гонококка: испытуемый штамм наносят на поверхность среды, помещают на нее диски из фильтровальной бумаги диаметром 1,5 см, пропитанных 10% растворами различных Сахаров, а через 18 ч роста культуры в термостате на все диски наносят по 1 капле 0,5% раствора фенолрота. При разложении сахара ферментом микроорганизма диск становится желтым, при отсутствии разложения остается красным.

В нашей стране в 1982 г. еще более экономичную методику предложила Т. Г. Коликова. На незасеянную поверхность среды наносят по 1 капле 80% раствора глюкозы, мальтозы, фруктозы, сахарозы и лактозы, растворенных в 0,2% растворе фенолового красного. В зоне диффузии растворов в агар крестообразно делают посев культуры (длина штрихов 1 см). Через 18 ч выращивания в термостате при температуре 36—37°С при разложении сахара вокруг роста среда приобретает желтый цвет, при отсутствии разложения — красный.

Два последних способа удобны при изучении малого количества штаммов, так как для исследования сахаролитических свойств одного штамма требуется одна чашка со средой вместо пяти [Беднова В. Н. и др., 1992 J.

Дифференциальные признаки грамотрицательных кокков представлены в табл. 2.

В последние годы все шире распространяются штаммы гонококка, продуцирующие ^-лактамазу, которая, инактивируя пенициллин, препятствует успешному лечению больных гонореей этим антибиотиком [Warren С, Phillips I., 1993]. Изучение распространенности /3-лактамазопродуцирующих штаммов гонококка проводится с 1976 г. В 1977 г. в Швеции был изучен один штамм, выделенный от матроса, прибывшего из Ганы, а в следующем году в ВОЗ поступило 397 штаммов из 18 стран. В США в 1980 г. число 0-лактамазопроду-цирующих штаммов по сравнению с 1979 г. увеличилось на 235%, а в 1981 г. — на 415% больше, чем в 1980 г. Н. W. Jaffe и соавт. (1981) объясняют это заносом этих штаммов в страну,

страница 32
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73

Скачать книгу "Кожные и венерические болезни. Руководство для врачей. Том 4" (5.06Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(10.12.2018)