медицинский каталог




Кожные и венерические болезни. Руководство для врачей. Том 4

Автор Ю.К.Скрипкин (ред.)

енностей возбудителя невозможно оценить такие важные патогенетические звенья, как взаимоотношения микроорганизма с клетками очагов поражения, формирование зон персистирования, изменение возбудителя в ходе лекарственной терапии и т. д.

Второй представитель патогенных микоплазм, поражающих мочеполовой тракт, — М. hominis — играет существенную роль в патологии беременности. У 50% женщин с лихорадкой после аборта наблюдалось увеличение количества антител к этому агенту. М. hominis изолирована из крови больных с септическим абортом.

Материалом для микробиологических исследований на наличие Ur. urealyticum и М. hominis служит соскоб со слизистой оболочки уретры. Соскоб берут на глубине 2—3 см. Непосредственно после забора материал необходимо поместить в пробирки с бульонной средой и инкубировать в термостате при температуре 37 °С в течение 24 ч для выращивания Ur. urealyticum и от 2 до 4 сут — для М. hominis. При исследовании препаратов в светооптическом микроскопе размер колоний варьирует от 20 до 200 мкм, реже достигает 300 мкм. Регистрация роста уреаплазм на твердых питательных средах производится при малом увеличении (50) светооптического микроскопа. В отдельных случаях, когда колонии сравнительно велики, их поверхность зернистая либо напоминает сморщенную глазунью (рис. 87), как у М. hominis (рис. 88). В большинстве случаев наблюдаются мелкие кольцевидные колонии (20—100 мкм), что связано с особенностью роста возбудителя.

При росте на средах с сульфатом марганца колонии Ur. urealyticum окрашены в коричневый или темно-коричневый цвет. Колонии М. hominis отличаются морфологически и остаются бесцветными.

Ультратонкие срезы колоний, залитые в эпоксидные смолы вместе с кусочком агара, позволяют судить о топографии отдельных клеток,

Рис. 87. Колония U. urealy-ticum, 48-часовой рост на плотной питательной среде; периферическая часть колонии мелкозернистая, центральная — сморщенная.

30 40 50 60 70

характере их расположения в колонии и форме последней (рис. 89). Как видно на электронограмме, клетки образуют кольцевидную структуру. Ближе к внутренней части кольца и в зонах, где скопление клеток наиболее велико, наблюдается лизис микроорганизмов, в то время как клетки, расположенные по периферии, имеют четкую структуру.

Отдельные микроколонии, которые, по-видимому, не регистрируются на светооптическом уровне, могут быть представлены 2—4 рядами клеток, врастающих в толщу агара. Основная часть клеток при этом имеет вытянутую форму и делится путем образования перемычек (рис. 90, 91).

Электронно-микроскопическое изучение материнских клеток

rirjyTценней поверх» ч\" и ограничивают iyiTc« и)ЫОгсннос электронно-плотное вещество, за счет чего

> мемЬрану»свободную от нитевидных •

ксахаридного 'Слоя Цитоплазма содерж? :ом и полисом Иуклео с н тями Д

Рис. 92. Ультраструктура Ur.i

orpaIсичивающай мембрана (С нуклеоид <Н), рибосомы (Р).

сцсссс мозга. Обсуждается

*.r."innr-fl t_v К ft ifi

?I

Рис. W у:раструк'., • ' • ' aminis- • • - -«ал куч • * ограничу.^--'лца» мембран, -.-./-л*), цвтоила.,-«.•<• «яссг?» * *t --г- (ЦМ)Г нухлеокд 'И), рибосомы- (ГУ х50 ООО.4 у О ВО;

СТО BCTJ

течение

седо

С В ОПЬ1 »: ? "С -•:

ч такой ! • и -из К

5iспита

i в ассоциации с гоиожожжэми. ухудшая!'

шшвшш ЩшочсиИ. I. ||др.,1Ш| Г5) изучали ассоциации мшжошшм и

м к гонококк *п vitro сшаде^елчггаует 1щии in vivo, что» по их мнению, ведет

.- '%«>; - - -. - - :й. О " -Уых мижоплазм у б^ШЬНЫХ .?! 'ШИррёбЙ,

978), Н. Young и соавт. (1981У"И ДрУ'

• , -ОЖИС<- ' Л'Й

[икошшзмы: Ur. urealyticum в сочетании

"um. М. Ъг- : и гонококк* - у 27

а плазмам и,

??с.

"С;|>.= :.,;.«ЛОН!

^г.чпгкИ Ьу К ft А

гонококка. Гонококки, находящиеся в таких микроколониях, полиморфны, имеют множественный нуклеоид и, что особенно важно, мощный периферический каплевидный слой, представляющий собой мукополисахаридное капсулоподобное покрытие [Овчинников Н. М. и др., 1979].

Можно предполагать, что воздействие на гонококк метаболитами уреаплазм, в частности аммиаком, образующимся в связи с уреазной активностью последней, повышает адаптационные возможности гонококка. Такие гонококки практически недоступны или малодоступны для фагоцитов. Внешнее покрытие образуется не только у гонококка, но и у уреаплазм.

До последнего времени оставался открытым вопрос о возможности фагоцитоза уреаплазм. Нами установлено, что эти микроорганизмы фагоцитируются нейтрофильными лейкоцитами, фагоцитоз прекращается на стадии формирования фагосомы. Внутриклеточные уре-аплазмы имеют четкую структуру, что свидетельствует об эндоци-тобиозе. Через 3 ч после начала лечения доксициклином внутриклеточные уреаплазмы сохраняют структуру, однако у отдельных микроорганизмов частично повреждается отграничивающая мембрана. Через 6 ч часть уреаплазм лизируется, однако некоторые из них сохраняют свою структуру.

Лабораторная диагностика уреаплазмоза

Общепринятым для обнаружения уреаплазм является бактериологический метод исследования. Наиболее простым методом определения в клинических образцах уреаплазм является тест на уреазу (цветной тест) в жидкой среде с последующим культивированием на плотную среду. Используют также прямой тест-пятно на уреазу с индикатором — сульфатом марганца или посев на плотную среду, содержащую сульфат марганца.

Индикация уреаплазм основывается на их уникальном свойстве расщеплять мочевину. При росте уреаплазм в жидкой питательной среде микроорганизмы расщепляют мочевину на углекислый газ и аммиак, что изменяет реакцию среды от кислой к щелочной и цвет индикатора (бромтимоловый синий) от лимонно-желтого до зеленого, а при высоких титрах — до синего цвета.

Эффективность бактериологического метода исследования в значительной степени определяется качеством питательных сред.

Приготовление жидкой питательной среды. В термоустойчивую колбу вместимостью 0,5 л помещают по 18 мл гидролизата бычьего сердца и гидролизата казеина (рН доводят до 5,5 добавлением 10% NaOH), добавляют свежедистиллированную воду до 300 мл и кипятят 10 мин. К концу кипячения добавляют 4 г пептона без кристаллического фиолетового и 5,7 мл 0,4% раствора бромтимолового синего. Как только пептон растворится, добавляют свежедистиллированную воду до 500 мл, раствор доводят до кипения и фильтруют через ватно-марлевый фильтр в литровую термоустойчивую колбу. Затем добавляют 0,064 г КН2РО4 и 2 г сухих пекарских дрожжей; рН

доводят до б,0±0,5 и снова стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С 15 мин.

После стерилизации основу охлаждают до температуры 37—38 °С и производят ее обогащение следующими стерильными добавками: 1) лошадиная сыворотка ненагретая, лучше без консерванта — 40 мл 10% раствора, 2) мочевина — 2 мл 10% раствора (0,05%), 3) L-цистеин гидрохлорид — 2 мл 2% раствора, 4) пенициллин 1 000 000 ЕД.

Приготовленную среду перемешивают, устанавливают рН 6,0 и разливают по 1,8 мл в стерильные микробиологические пробирки с ватно-марлевыми пробками; цвет среды лимонно-желтый. Среду хранят при температуре —20 °С и перед использованием оттаивают. В случае отсутствия низкотемпературных холодильников среду можно хранить при температуре 4 °С. Среда пригодна для использования в течение 1 мес и более.

Для подавления роста дрожжеподобных грибов рода Candida при взятии материала у женщин в среду добавляют нистатина 50 ЕД/мл, амфотерицина В 5 ЕД/мл или водорастворимого амфоглюкамина 10 ЕД/мл.

Чистую культуру уреаплазм получают, добавляя в среду водорастворимый линкомицина гидрохлорид — 25 мкг/мл, что приводит к подавлению роста классических микоплазм (М. hominis).

При совместном росте Ur. urealyticum и М. hominis (среда без линкомицина) часто наблюдается синяя окраска среды, в то время как присутствие в клинических образцах только М. hominis не дает характерного изменения цвета среды. Рост Ur. urealyticum наблюдается через 16—24 ч (редко через 36—48 ч), а М. hominis — через 48—72 ч. Цвет изменяется во всей пробирке без помутнения. Осадок в среде появляется при неправильной технологии приготовления среды, при избытке клинического материала, особенно из влагалища, и при росте пенициллинрезистентных уреазопродуцирующих бактерий. Может иметь место совместный рост микроорганизмов, что легко проверяется субкультивацией культуры из жидкой среды на плотную. Пересев надо производить в начальной стадии роста уреаплазм (начало изменения цвета в бульоне), что является оптимальным для сохранения жизнеспособности этих микроорганизмов.

При щелочной реакции среды с мочевиной культуры уреаплазм быстро погибают. Жизнеспособность культур уреаплазм при температуре 37 °С сохраняется в течение 48—72 ч (некоторые штаммы выживают в течение 7 дней), а при низких температурах — и более.

Выращивание в жидкой среде уреаплазм производят в аэробных условиях. Уреаплазмы весьма чувствительны к ацетату талия, применяемому в соответствии со стандартными методиками выделения классических микоплазм.

Приготовление основы для плотной питательной среды. Техника приготовления основы для плотной питательной среды такая же, как и для жидкой. В термоустойчивую колбу вместимостью 0,3 л помещают по 12 мл гидролизата бычьего сердца и гидролизата казеина (рН 5,5), 3,6 г агар-агара и добавляют свежедистиллированную воду до 200 мл. Агар-агар растворяют при комнатной температуре, кипятят 10 мин, добавляют пептон без кристаллического фиолетового в количестве 2,62 г и после растворения пептона заполняют колбу свежедистиллированной водой до отметки 300 мл.

В термоустойчивую колбу вместимостью 0,5 л фильтруют горячую основу и к 165 мл фильтрата добавляют 0,35 г КН2РО4, 0,43 г сульфата марганца и 1 г сухих пекарских дрожжей. Устанавливают рН 2 н. NHC1 или 2 н. КОН до 6,0±0,5 и стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С 15 мин. После охлаждения основы до 56 °С асептически вносят добавки: 1) лошадиной сыворотки 40 мл (20%) , 2) мочевины 10% раствора 2 мл (0,1%) , 3) L-цистеина гидрохлорида 2% раствора 1 мл (0,01%) , 4) пенициллина 1 флакон —

страница 48
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73

Скачать книгу "Кожные и венерические болезни. Руководство для врачей. Том 4" (5.06Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(19.09.2018)